Другие разделы:

 


Рейтинг@Mail.ru

 

Хроматография белков и нуклеиновых кислот. Остерман Л.А.

Хроматография белков и нуклеиновых кислот

Остерман Л.А.

Раздел: Химия, Биохимия


В книге дан подробный анализ современных технических приемов хроматографии и возможностей новейшей аппаратуры, а также полный справочный материал по обменникам и сорбентам. Анализируются последние достижения в гель-фильтрации, распределительной, адсорбционной, ионообменной, аффинной и тонкослойной хроматографии. В каждом из методов наряду с обычной хроматографией рассмотрены достижения методов высокоэффективной хроматографии при высоком давлении в колонках и на микропластинках.
Рассчитана на биохимиков, химиков, медиков, фармакологов, работников пищевой и микробиологической промышленности, а также на студентов и преподавателей.

 

DJVU, 536 стр., 1985 г.
Артикул: 012368
Размер архива: 5,22 Мб

СКАЧАТЬ КНИГУ

 

--- СОДЕРЖАНИЕ ---

Введение

Глава 1. КЛАССИФИКАЦИЯ И ЭЛЕМЕНТЫ ТЕОРИИ ХРОМАТОГРАФИИ
Классификация хроматографических методов
Классификация по принципу фракционирования
Классификация по способу элюции
Классификация по расположению неподвижной фазы
Элементы теории хроматографической элюции
Хроматографический процесс
Хроматографическая зона
Концепция теоретических тарелок
Разрешение близко мигрирующих зон
Оптимизация условий фракционирования
Градиентная элюция
Хроматография макромолекул

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ МАТРИЦ СОРБЕНТОВ И ОБМЕННИКОВ
Целлюлоза
Гели на основе декстрана (сефадексы)
Агароза
Полиакриламидный гель (ПААГ)
Сефакрилы
Ультрогели типа АсА
Полистирольные смолы
Полиамидные смолы
Кизельгур (целит, диатомовая земля)
Силикагель
Окись алюминия
Пористое стекло
Оксианатит

Глава 3. ТЕХНИКА КОЛОНОЧНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Хроматография при низком давлении
Хроматографические колонки
Резервуары для элюента. Смесители градиента
Внесение препарата в колонку
Перистальтические насосы
Детекторы
Коллекторы фракции
Вспомогательное оборудование
Хроматография при высоком давлении
Колонки
Внесение препарата
Насосы
Задание градиента элюции
Детекторы
Автоматизация
Хроматография при умеренном давлении

Глава 4. ГЕЛЬ-ФИЛЬТРАЦИЯ
Общая характеристика метода
Основной принцип
Коэффициенты распределения
График селективности
Эффективность фракционирования
Характеристики продажных матриц
Матрицы для гель-фильтрации при низком давлении
Матрицы для гель-фильтрации при высоком давлении
Методические особенности гель-фильтрации при низком давлении
Подготовка матрицы
Набивка колонки
Проверка качества набивки. Определение V0
Внесение препарата
Поддержание рабочего режима
Регенерация колонки
Выбор параметров хроматографического процесса
Выбор матрицы
Размеры колонки
Выбор элюента
Скорость элюции
Оптимизация условий эксперимента
Очистка и фракционирование макромолекул
Белки и пептиды
Белково-нуклеиновые комплексы
Нуклеиновые кислоты
Определение молекулярной массы белка
Нативные белки
Денатурированные белки
Гель-фильтрация при высоком давлении (ЖХВД)
Гель-фильтрация в тонком слое
Литература

Глава 5. РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Вводные замечания
Нормальнофазовая распределительная хроматография
Распределительная хроматография в обращенных фазах
Разделение тРНК в системе ХОФ-5
Разделение ДНК в системе ХОФ-5
Обратнофазовая гидрофобная хроматография при низком давлении
Немодифицированная сефароза. Элюция снижающимся градиентом концентрации соли
Гидрофобизированные гели агарозы
Обратнофазовая гидрофобная хроматография при высоком давлении (ЖХВД)
Вводные замечания
Подготовка эксперимента
Фракционирование аминокислот
Идентификация ФТГ-производных аминокислот
Разделение пептидов в градиентах ацетонитрила и спиртов
Ион-парная хроматография пептидов
Разделение нуклеозидов и нуклеотидов
Фракционирование и очистка белков
Фракционирование нуклеиновых кислот
Нормальнофазовая ЖХВД
Литература

Глава 6. АДСОРБЦИОННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Вводные замечания
Сорбенты
Приготовление оксиапатита
Сорбционные свойства оксиапатита
Сорбция белков
Сорбция нуклеиновых кислот
Некоторые особенности хроматографии на оксиапатите
Фракционирование и очистка белков
Фракционирование и очистка нуклеиновых кислот
Разделение двунитевой и однонитевой ДНК
Очистка гибридов ДНК—РНК
Очистка НК и нуклеопротеидов от гликогена
Очистка и концентрирование вирусов
Очистка белков сорбцией на «Alumina Cy» и геле фосфата кальция в объеме
Нуклеопротеид-целитная хроматография
Хроматография на нитроцеллюлозе
Сорбция на пористом стекле
Литература

Глава 7. ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Вводные замечания
Компоненты хроматографической системы
Ионообменники
Элюент
Хроматографируемые вещества
Хроматографический процесс
Ионные взаимодействия вещества и сорбента
Управление силой ионного взаимодействия
Неионные взаимодействия вещества и сорбента
Примеси ионов тяжелых металлов
Характеристики продажных ионообменников
Ионообменники на основе полистирола (смолы)
Ионообменники на основе полиакрилата и полиметакрилата
Ионообменные целлюлозы
Ионообменные сефадексы
Ионообменники на основе агарозы
Ионообменники для ЖХВД
Ионообменники для хроматографии белков при умеренных давлениях фирмы «Pharmacia»
Подготовка обменников к набивке в колонку
Преформирование и промывка
Перевод в нужную ионную форму
Опасность поглощения CO2
Дополнительные замечания
Выбор условий статической ионообменной хроматографии
Нейтрализация щелочи или кислоты без образования соли
Замена ионов
Обессоливание растворов
Удаление некоторых органических примесей
Концентрирование препаратов
Разделение компонентов смеси, сильно различающихся по сродству к обменнику
Выбор условий динамической ионообменной хроматографии
Выбор ионообменника
Выбор типа элюции
Выбор pH буфера для элюции
Выбор концентрации соли
Сохранение нативности препарата
Выбор объема элюента
Выбор размеров колонки
Выбор скорости элюции
Сбор и обработка фракций
Регенерация ионообменника
Аминокислотные анализаторы
Фракционирование пептидов
Химические методы гидролиза белков
Ферментативные методы гидролиза белков
Хроматография пептидов
Очистка и фракционирование белков
Концентрирование белка
Препаративная хроматография на ранних стадиях очистки белка
Фракционирование белков
Ионообменная ЖХВД белков
Система для быстрой хроматографии белков фирмы «Pharmacia»
Фракционирование нуклеиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов
Нуклеиновые основания
Нуклеозиды
Нуклеотиды и короткие олигонуклеотиды
Использование ЖХВД
Хроматография олигонуклеотидов и нуклеиновых кислот
Хроматофокусирование
Колонки для хроматофокусирования
Фракционирование белков
Литература

Глава 8. АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Введение
Компоненты аффинного сорбента
Матрицы
Активация матриц
Спенсеры
Активированные спенсеры
Лиганды с индивидуальной специфичностью
Лиганды с групповой специфичностью
Посадка лигандов на активированные матрицы
Посадка лигандов на спейсеры с помощью конденсирующих агентов
Характер закрепления лиганда на матрице
Иммобилизация нуклеиновых кислот в качестве лигандов
Сорбенты для ковалентной хроматографии
Фирменные аффинные сорбенты
Подготовка и проведение эксперимента
Выбор сорбента и характера хроматографического процесса
Выбор концентрации лиганда
Загрузка сорбента
Выбор буфера для посадки вещества
Выбор элюента и метода элюции
Проведение эксперимента
Электрофоретическая элюция
Аффинная ЖХВД
Избранные примеры
Очистка ферментов клеточного метаболизма
Белки, связанные с нуклеиновыми кислотами
Биоспоцифическая элюция белков
Аффинная хроматография нуклеиновых кислот
Аффинная элюция с ионообменника
Аффинный электрофорез
Литература

Глава 9. ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Введение
Носители для ТСХ и электрофореза в тонком слое
Ацетилцеллюлоза для электрофореза
Сорбенты для ТСХ
Техника ТСХ
Приготовление пластинок
Нанесение препаратов
«Проявление» пластинок (хроматографпческая элюция)
Обнаружение пятен или полос
Элюция вещества с пластинки
Примеры использования ТСХ и ТСЭ
Фракционирование аминокислот и их производных
Фракционирование пептидов
Фракционирование нуклеозидов и нуклеотидов
Фракционирование олигонуклеотидов
Секвенирование тРНК
Литература

Приложение 1. СЕКВЕНАТОРЫ БЕЛКОВ
Приложение 2. АМИНОКИСЛОТНЫЕ АНАЛИЗАТОРЫ
Приложение 3. НОВЫЕ СОРБЕНТЫ

УКАЗАТЕЛЬ ПРИМЕРОВ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ

 

скачать электронную медицинскую книгу Хроматография белков и нуклеиновых кислот Остерман Л.А. скачать книгу бесплатно