Другие разделы:

 


Рейтинг@Mail.ru

 

Методы исследований в иммунологии. В 3-х томах. Лефковитс И., Пернис Б., Трукко М., Такач Б. и др.

Методы исследований в иммунологии. В 3-х томах

Лефковитс И., Пернис Б., Трукко М., Такач Б. и др.

Раздел: Кожно-венерические заболевания, Иммунология, Аллергология


Том 1. Коллективная монография, написанная ведущими специалистами, работавшими в Базельском институте иммунологии (Швейцария), посвящена методам иммунохимии и клеточной иммунологии. Авторы имеют большой опыт в этой области, что определяет основные достоинства книги — удачный подбор методов и исчерпывающее, но вместе с тем краткое описание каждого из них. Рассмотрены определение активности антител, их анализ методом пептидных карт, исследование белков методами электрофореза, изо-электрофокусирования и изотахофореза, методы иммунофлуорес-ценции, культивирования лимфоцитов, изотопные и другие методы.
Для иммунологов, иммунохимиков, микробиологов, вирусологов, биохимиков, генетиков, врачей, лаборантов научно-исследовательских и клинических лабораторий, аспирантов и студентов биологических специальностей.
Том 2. Настоящая книга авторов из Нидерландов, США, Швейцарии, Италия является как бы продолжением ранее вышедшего на русской языке издания под той же редакцией (Методы исследований в иммунологии, М.: Мир, 1981) и вместе с тем самостоятельной книгой. Особенную ценность представляют самые актуальные методы — метод гибридом, методы клонирования функционально активных Т-клеток и комплекс методов для исследования отдельных стадий иммуногенезе in vitro. Методы отличаются надежностью, так как отработаны авторами в Базельском институте иммунологии — одном из лучших в мире институтов этого профиля.
Предназначена для иммунологов, иммунохимиков, микробиологов, вирусологов, биохимиков, генетиков, врачей, лаборантов научно-исследовательских институтов, аспирантов и студентов биологических специальностей.
Том 3. Настоящая книга авторов нз Нидерландов, США, Швейцарии. Италии представляет собой перевод третьего тома серии Immunological Methods; переводы двух первых томов выпущены издательством <Мир> в 1981 и 1983 гг. В данную книгу вошли последние, наиболее актуальные методические разработки в области молекулярной и клеточной иммунологии.
Предназначена для иммунологов, специалистов по молекулярной биологии, цитологов, врачей, лаборантов научно-исследовательских институтов, аспирантов и студентов биологических специальностей.

 

DJVU, 1364 стр., 1981-1988 г.
Артикул: 013321
Размер архива: 14,1 Мб

СКАЧАТЬ КНИГУ

 

--- СОДЕРЖАНИЕ ---

--- ТОМ 1. Методы исследований в иммунологии ---

Предисловие редактора перевода
Предисловие
Список авторов

Глава 1. Оценка качества антител и клеточных рецепторов
I. Введение
II. Простые равновесия
III. Конкурентные равновесия
Список литературы

Глава 2. Выделение и характеристика иммуноглобулинов, антител и их полипептидных цепей
I. Введение
II. Разделение с помощью концентрированных растворов нейтральных солей
III. Очистка иммуноглобулинов
IV. Гель-хроматография
V. Электрофоретическое разделение в геле
VI. Аффинная хроматография с использованием иммуносорбентов на основе сефарозы
VII. Иммуносорбенты на основе белков, сшитых глутаровым альдегидом
VIII. Разделение полипептидных цепей
IX. Использование белка A Staphylococcus aureus в качестве иммуносорбента для выделения иммуноглобулинов
Список литературы

Глава 3. Метод пептидных карт для анализа наномолярных количеств белка
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Реагенты и приборы
IV. Методика
V. Оценка метода
VI. Пример применения метода для исследования антигенных вариантов гемагглютинина вируса гриппа А
Список литературы

Глава 4. Электрофорез белков в пластинках полиакриламидного геля
I. Введение
II. Проведение электрофореза в полиакриламидном геле
III. Заключение
Список литературы

Глава 5. Изучение иммуноглобулинов методом аналитического изоэлектрофокусирования
I. Введение
II. Принцип метода
III. Реагенты и приборы
IV. Методики
V. Применение, чувствительность и воспроизводимость ИЭФ
Список литературы

Глава 6. Препаративное выделение моноклональных антител с помощью изоэлектрофокусирования в горизонтальном слое сефадекса G-75
I. Введение
II. Принцип метода
III. Материалы и приборы
IV. Методика
V. Применение
VI. Ограничение метода
VII. Степень очистки и чувствительность
VIII. Воспроизводимость
Список литературы

Глава 7. Изотахофорез иммуноглобулинов
I. Введение
II. Методика
III. Обсуждение
Список литературы

Глава 8. Химическая модификация белков, гаптенов и нерастворимых носителей
I. Введение
II. Теоретические основы
III. Практическое осуществление
Список литературы

Глава 9. Флуоресцирующие антитела и их применение при анализе антигенов лимфоидных клеток
I. Введение
II. Реагенты для иммунофлуоресценции
III. Окрашивание
IV. Общие замечания
Список литературы

Глава 10. Радиоактивное маркирование и иммуноспецифическое выделение макромолекулярных компонентов клеточной поверхности
I. Введение
И. Методика маркирования
III. Разрушение меченых клеток
IV. Специфическая очистка меченых поверхностных компонентов клетки
Список литературы

Глава 11. Присоединение гаптенов к живым носителям
I. Введение
II. Приготовление ГСК-эфиров
III. Присоединение гаптена к носителям
IV. Условия ЛОК в культуре
V. Выводы по результатам оценки ЛОК в отношении лимфоцитов, нагруженных гаптеном
Список литературы

Глава 12. Получение и анализ мышиных антиаллотипических сывороток
I. Получение антиаллотипической сыворотки
II. Количественная оценка антиаллотипической сыворотки
III. Применение
Список литературы

Глава 13. Получение мышиных антисывороток к антигенам гистосовместимости
I. Вводные замечания
II. Принцип метода
III. Методы
IV. Контроли
V. Критическая оценка метода
Список литературы

Глава 14. HLA-типироваиие в реакции комплемент-зависимого лимфоцитолиза
I. Введение
II. Принцип реакции
III. Детали метода
IV. Семейный анализ
V. Некоторые замечания о цитотоксическом тесте
VI. Методика определения антигенов системы HLA на В-клетках
Список литературы

Глава 15. Смешанная культура лимфоцитов (СКЛ) мыши
I. Первичная СКЛ
II. Вторичная СКЛ
III. Критические замечания
Список литературы

Глава 16. Метод тонкого разделения розеткообразующнх клеток
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Образование розеток
IV. Фракционирование клеток
V. Выход, истощение, обогащение
VI. Применение, чувствительность и ограничения метода
VII. Резюме
Список литературы

Глава 17. Выявление антигенов клеточной поверхности с помощью розеткообразующих эритроцитов, нагруженных стафилококковым белком А
I. Введение
II. Принцип метода
III. Реагенты
IV. Методика
V. Контроли
VI. Дополнительные замечания
VII. Применение метода
Список литературы

Глава 18. Выделение гаптен-специфических В-лимфоцитов с помощью иммуносорбентов на основе геля желатины, конъюгированной с гаптеном
I. Принцип метода
II. Методика
III. Применения метода
IV. Ограничения метода
Список литературы

Глава 19. Исследование антителообразующих клеток методом локального гемолиза в геле
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Реагенты и приборы
IV. Приготовление клеточных суспензий
V. Различные варианты реакции
VI. Количественный анализ
VII. Существенные методические моменты
Список литературы

Глава 20. Выделение индивидуальных антителообразующих клеток, дающих локальный гемолиз
I. Назначение и принцип метода
II. Реактивы
III. Методика
Список литературы

Глава 21. Изучение Т-клеток, специфически связывающих аллоантигены при активации в смешанной культуре лимфоцитов
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Клетки и аллоантисыворотки
IV. Выявление Т-клеточных маркеров и антигенов стимулирующих клеток на отвечающих бластах
V. Изучение клеток, связывающих аллоантигены
VI. Критическая оценка: применение метода и его ограничения
VII. Заключение
Список литературы

Глава 22. Оценка антиген-специфической пролиферации мышиных Т-клеток
I. Назначение метода
IL Принцип метода
III. Реагенты и приборы
IV. Методика
V. Критическая оценка
Список литературы

Глава 23. Антиген-специфический хелперный фактор Т-клеток и его акцептор
I. Введение
II. Принцип метода
III. Реагенты и приборы
IV. Методика
V. Учет результатов
VI. Критическая оценка
Список литературы

Глава 24. Иммунизация in vitro клеток мышиной селезенки в суспензии
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Животные, реагенты, приборы
IV. Методика
V. Критическая оценка метода
Список литературы

Глава 25. Индукция вторичного образования антител in vitro в культуре лимфоцитов периферической крови кролика
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Реагенты
IV. Методика
V. Дополнительные замечания
Список литературы

Глава 26. Индукция иммунного ответа с высоким уровнем антител доминирующего клонотипа
I. Введение
II. Принцип метода
III. Приготовление вакцин
IV. Иммунизация
V. Серийный перенос ограниченного числа клеток селезенки
VI. Критическая оценка
Список литературы

Глава 27. Анализ клеточных суспензий методом лимитирующих разведений
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Реагенты и приборы
IV. Методы
V. Ограничения и чувствительность метода
Список литературы

Глава 28. Получение и поддержание линий мышиных лимфоидных клеток в культуре
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Реагенты, животные, клетки и вирусы
IV. Методика
V. Критическая оценка
Список литературы

Глава 29. Клонирование клеток в полужидкой или вязкой среде
I. Введение
II. Реагенты
III. Методика
IV. Варианты применения
Список литературы

Глава 30. Приготовление вируса Сендай для гибридизации клеток
I. Выращивание вируса
II. Титрование вируса
III. Концентрация вируса
IV. Инактивация вируса
V. Оценка инфекционности вируса
Список литературы

Глава 31. Слияние лимфоцитов
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Реагенты и приборы
IV. Методика
V. Критическая оценка
Список литературы

Глава 32. Клонирование опухолевых лимфоидных клеток в мягком агаре. Выявление гибридных клонов, образующих антитела к бараньим эритроцитам (БЭ)
I. Назначение и принцип метода
II. Реагенты и приборы
III. Методика
IV. Критическая оценка метода
Список литературы

Глава 33. Изотопная лаборатория
I. Введение
II. Реагенты и приборы
III. Специальные методики
IV. Надзор за радиацией и радиоактивным загрязнением
Список литературы

Глава 34. Анализ иммунологических данных
I. Введение
II. Примеры практического использования
Список литературы

Список сокращений
Предметный указатель


--- ТОМ 2. Иммунология. Методы исследований ---

От переводчика
Предисловие
Список авторов
Список сокращений

Глава 1. Определение константы равновесия моноклональных антител, специфичных к антигенам клеточной поверхности
I. Введение
II. Теоретические основы
III. Методический подход
IV. Примеры
V. Критическая оценка
VI. Приложение
Литература

Глава 2. Биохимический анализ антигенов клеточной поверхности с помощью моноклональных антител
I. Введение
II. Получение антител
III. Методы введения метки в антигены клеточной поверхности
IV. Приготовление препаратов клеточных мембран
V. Анализ антигенов клеточной поверхности
VI. Заключение
Литература

Глава 3. Двумерный электрофорез в геле
I. Введение
II. Одномерный электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПАГЭ)
III. Методы двумерного разделения в геле
Литература

Глава 4. Определение антител к ДНК
I. Введение
II. Препараты антигенов
III. Методы определения антител к ДНК
IV. Критическая оценка методов
Литература

Глава 5. Жидкостная хроматография белков и пептидов при высоких давлениях
I. Введение
II. Основные принципы ЖХВД
III. Компоненты системы ЖХВД
IV. Примеры использования ЖХВД
Литература

Глава 6. Применение методов физики поверхностей в иммунологии
I. Введение. Иммунологические феномены и физика поверхностей
II. Введение в физику поверхностных явлений
III. Методы измерений
IV. Иммунометрия в тонком слое
V. Заключение
Литература

Глава 7. Применение в клеточной иммунологии гаптенизированных антител к поверхностным антигенам клеток
I. Введение
II. Непрямой метод гаптенизированных антител
III. Приготовление реагентов для непрямого метода гаптенизированных антител
IV. Примеры применения непрямого метода гаптенизированных антител
V. Критическая оценка
Литература

Глава 8. HLA-DR-типирование в реакции комплемент-зависимого цитолиза В-лимфоцитов
I. Введение
II. Принцип метода
III. Постановка цитотоксического теста
IV. Модификации теста лимфоцитотоксичности
V. Сравнительная оценка модификаций метода
VI. Приборы, коммерческие реагенты и растворы
Литература

Глава 9. Определение клеток, секретирующих иммуноглобулины, методом обратного пассивного локального гемолиза эритроцитов, нагруженных белком A Staphylococcus aureus
I. Введение
II. Реагенты
III. Взвеси клеток
IV. Локальный гемолиз в геле
V. Подсчет клеток, образующих зоны гемолиза
VT. Общие замечания
VII. Приложение
Литература

Глава 10. Получение in vitro и определение активности антиген-специфических Т-хелперных факторов
I. Введение
II. Реагенты и приборы
III. Индукция образования антиген-специфического хелперного фактора при культивировании лимфоцитов по Марбруку
IV. Определение активности антиген-специфического хелперного фактора
V. Определение клеток, образующих антитела, методом локального гемолиза
VI. Резюме
Литература

Глава 11. Определение активности гаптен-специфических Т-хелперов при иммунном ответе на гаптенизированные клеточные антигены
I. Введение
II. Принципы и модификации метода
III. Реагенты
IV. Методы
V. Дополнительные замечания
Литература

Глава 12. Анализ предшественников цитотоксических Т-лимфоцитов методом лимитирующих разведений
I. Принцип метода
II. Материалы
III. Методы
IV. Схема эксперимента
V. Анализ результатов
VI. Дальнейшее развитие метода лимитирующих разведений
VII. Ограничения метода
Литература

Глава 13. Индукция образования антител в культуре лимфоцитов периферической крови человека
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Материалы
IV. Методика
V. Дополнительные замечания
Литература

Глава 14. Индукция образования антител в костном мозгу мыши
I. Введение
П. Получение клеток костного мозга мыши
III. Распределение антителообразующих клеток в костном мозгу разных костей
IV. Активность аптителообразующих клеток в пересчете на весь костный мозг
V. Кинетика иммунного ответа
VI. Факторы, влияющие на иммунный ответ
Литература

Глава 15. Длительное культивирование и клонирование антиген-специфических Т-хелперов
I. Назначение и принцип метода
II. Материалы
III. Основная методика
IV. Критическая оценка
Литература

Глава 16. Клонирование аллореактивных Т-клеток
I. Назначение метода
II. Принцип метода
III. Материалы
IV. Методики
V. Критическая оценка
Литература

Глава 17. Методы получения гибридом
I. Введение
II. Предварительные этапы перед слиянием
III. Приготовление культуральных сред, их компонентов и клеточных суспензий
IV. Слияние клеток с помощью полиэтилен гликоля
V. Продукты, синтезируемые клетками гибридом
VI. Замораживание и оттаивание гибридомных клеток
Литература

Глава 18. Определение продуктов, синтезируемых гибридомами, с помощью иммуноферментного метода
I. Введение
П. Материалы
III. Иммуноферментный метод
IV. Заключение
Литература

Предметный указатель


--- ТОМ 3. Иммунологические методы исследований ---

Предисловие редактора перевода
Предисловие
Список авторов
Список сокращений

Глава 1. МЕТОДЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В МОЛЕКУЛЯРНОЙ ИММУНОЛОГИИ: «ПРОГУЛКА ВДОЛЬ ХРОМОСОМЫ» В ОБЛАСТИ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ
I. Введение
II. Материалы
III. Конструирование космидных библиотек
A. Частичный гидролиз эукариотической ДНК
Б. Фракционирование в сахарозном градиенте
B. Идентификация фракций, содержащих фрагменты ДНК размером 30—50 kb
Г. Приготовление «плеч» вектора
Д. Лигирование фрагментов вектора и эукариотической ДНК
Е. Упаковка in vitro
Ж. Титрование
3. Рассев библиотеки
И. Получение реплик
К. Лизис и связывание с ДНК
IV. Скрининг космидных библиотек
A. Преинкубация
Б. Гибридизация
B. Промывка
Г. Радиоавтография, проявление, хранение
Д. Идентификация и отсев положительных колоний
Е. Повторный скрининг положительных колоний
Ж. Хранение космидных клонов
V. Характеристика космидных клонов
A. Выделение ДНК
Б. Анализ методом дот-блот
B. Рестрикционное картирование
Г. Выделение зондов для «прогулки вдоль хромосомы»
VI. Критическая оценка
Литература

Глава 2. ТРАНСФОРМАЦИЯ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ ДНК
I. Введение
II. Доминантные селектируемые маркеры
III. Методы стабильного переноса генов
А. Копреципитация ДНК с фосфатом кальция
Б. Слияние бактериальных протопластов
IV. Другие методы стабильного переноса генов
Литература

Глава 3. КЛОНИРОВАНИЕ кДНК С ПОМОЩЬЮ ВЕКТОРОВ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИХ ЭКСПРЕССИЮ В КЛЕТКАХ-ХОЗЯЕВАХ
I. Введение
II. Общие подходы и связанные с ними трудности
III. Экспериментальные процедуры
A. Материалы общего назначения и исходные растворы
Б. Получение полисомной мРНК
B. Подготовка вектора-затравки
Г. Получение линкеров
Д. Синтез кДНК
Е. Циклизация плазмиды с помощью линкера, содержащего oligo(dG)-концевую последовательность
Ж. Синтез второй цепи кДНК путем замещения мРНК
3. Трансформация бактерий плазмидой, полученной на этапе III, Ж
И. Селекция с помощью гибридизации
К. Индукция триптофанового оперона и получение бактериального экстракта
Л. Скрининг с помощью антител
IV. Общие замечания
A. Метод Хейдекера — Мессинга
Б. Состыкованные полипептиды
B. Эукариотическая система
Литература

Глава 4. КОНСТРУИРОВАНИЕ ВЕКТОРОВ ДЛЯ «ОБРАТНОЙ ГЕНЕТИКИ» ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
I. Введение
II. Общая стратегия
А. Векторы для клеточной трансформации
Б. Обычно используемые векторы
III. Материалы и исходные растворы
IV. Экспериментальные процедуры
A. Экстракция мини-плазмид
Б. Быстрое препаративное получение плазмид
B. Очистка фрагментов ДНК в геле легкоплавкой агарозы
Г. Лигирование выделенных фрагментов с соответствующим вектором
Д. Получение компетентных бактерий с помощью CaCl2
Е. Трансформация компетентных бактерий
Ж. Стратегия для отбора генетических конструкций
V. Примеры конструкций
А. Конструкции, полученные на основе генов IgM (генов анти-TNP легкой и тяжелой цепи)
Б. Работа с клонированными генами in vitro
Литература

Глава 5. МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К СИНТЕЗУ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ
I. Введение
II. Основные принципы синтеза
A. Твердая фаза
Б. Триэфирный метод
B. Фосфитный метод
Г. Защищенные блоки элонгации
Д. Удаление защитных групп
Е. Синтез вручную на полимерном носителе
Ж. Синтезаторы
III. Экспериментальная часть
A. Функционализацня стеклянного носителя
Б. Отщепление цианэтильной группы от триэфиров мономеров и димеров и подготовка к этапу конденсации на носителе
B. Активация амидитов для реакции на носителе
Г. Активация и связывание диэфиров
Д. Проведение реакций в условиях полного отсутствия влаги
Е. Тритильный анализ
Ж. Удаление защитных групп и очистка дезоксирибонуклеотидов после синтеза на полимерном носителе
IV. Реагенты и растворители, которые необходимо очищать или готовить
Литература

Глава 6. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ (ВЖХ) БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ БЕЛКОВ В НАНОГРАММОВЫХ (ПИКОМОЛЬНЫХ) КОЛИЧЕСТВАХ
I. Введение
II. Материалы и методы
A. Оборудование
Б. Матрицы для колонок
B. Определения биологической активности
Г. Аминокислотный анализ
III. Разделение по размеру: гель-проникающая хроматография
A. Введение
Б. Реагенты и условия элюции
B. Использование для очистки и характеристики МГФР
Г. Аналитический вариант
Д. Переход к препаративному разделению
IV. Разделение по заряду: хроматография на ионообменных носителях и гидроксиапатите
А. Ионообменная хроматография (ИОХ)
Б. Хроматография на гидроксиапатите
V. Разделение по гидрофобным свойствам: обратнофазовая хроматография
A. Введение
Б. Реагенты и условия элюции
B. Использование обратнофазовой хроматографии
Г. Общие замечания для аналитического варианта разделения
Д. Препаративное выделение
VI. Количественное определение белка и пределы чувствительности
А. Введение
Б. Реагенты и условия элюции
В. Определение по УФ-поглощению при 280 и 205 нм
Г. Сравнение ошибок при количественном определении белка по поглощению УФ-света и колориметрическими методами
VII. Очистка белков
A. Предварительные замечания
Б. Некоторые необоснованные представления
B. Работа с образцом
Г. Применение
Д. Препаративное разделение
Литература

Глава 7. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
I. Введение
II. ВЖХ: теория, практика и оборудование
A. Теория
Б. Практика
B. Оборудование
III. Использование ВЖХ для очистки и исследования иммуноглобулинов
A. Общие замечания
Б. Гель-проникающая ВЖХ (ГП-ВЖХ)
B. Обратнофазовая ВЖХ (ОФ-ВЖХ)
Г. ВЖХ на гидроксиапатите (ГА-ВЖХ)
IV. Обсуждение
Литература

Глава 8. ПОЛУЧЕНИЕ ЛИПОСОМ, СОДЕРЖАЩИХ МЕМБРАННЫЕ БЕЛКИ ЛИМФОЦИТОВ
I. Введение
II. Выделение мембранных белков
A. Принцип метода
Б. Приготовление препаратов клеточных мембран
B. Выделение мембранных гликопротеинов
Г. Очистка индивидуальных белков с помощью аффинной хроматографии
III. Получение липосом
A. Принцип метода
Б. Получение клеточных липидов
B. Синтетические липидные смеси
Г. Получение липосом с использованием полистирольных гранул SM2
Д. Получение липосом после удаления детергента диализом
Е. Очистка липосом
IV. Применение
А. Активация цитотоксических Т-клеток
Б. Перенос макромолекул за счет слияния липосом с клетками
Литература

Глава 9. ОБНАРУЖЕНИЕ ГЛИКОЛИПИДНЫХ АНТИГЕНОВ С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
I. Введение
II. Предварительные тесты
III. Экстракция липидов
A. Принцип метода
Б. Материалы
B. Процедура экстракции
IV. Твердофазный РИА
A. Принцип метода
Б. Материалы
B. Процедура определения
V. Ингибирование гаптенами и связывание гаптенов
VI. Тонкослойная хроматография
A. Принцип метода
Б. Оборудование
B. Реактивы
Г. Обработка антителами
Д. Химическое окрашивание
VII. Критическая оценка
Литература

Глава 10. КАРТИРОВАНИЕ НОВЫХ ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫХ АНТИГЕНОВ В-ЛИМФОЦИТОВ
I. Введение
II. Определение антигенных маркеров дифференцировки В-клеток с помощью метода негативного отбора
A. Общие требования к методу определения
Б. Иммунизация и слияние
B. Отбор позитивных гибридных клонов
Г. Клонирование гибридов, секретирующих МА
III. Анализ антигенных маркеров дифференцировки В-клеток с помощью двумерного электрофореза
А. Цель и схема эксперимента
Б. Техника двумерного электрофореза
IV. Приложение
Литература

Глава 11. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СИСТЕМЫ 1SODALT ДВУМЕРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА ДЛЯ АНАЛИЗА БОЛЬШОГО ЧИСЛА ОБРАЗЦОВ
I. Назначение метода
II. Материалы
А. Оборудование
Б. Растворы и буферы
III. Методы
A. Биосинтетическое введение метки
Б. Приготовление образцов
B. Разделение по заряду: ISO-разделение
Г. Разделение по размеру: DALT-разделение
Д. Радиоавтография и радиофлюорография
IV. Критическая оценка
A. Чувствительность
Б. Окрашивание серебром или биосинтетическое мечение
B. Проблема амфолинов
Г. Электроэндосмос
Д. Горизонтальное искажение полос
Е. Сопоставление радиоавтографии и радиофлюорографии
Литература

Глава 12. ТИПИРОВАНИЕ ТКАНЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОСИНТЕТИЧЕСКИ МЕЧЕННЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
I. Введение
А. Принцип метода
Б. Альтернативные методы
II. Биосинтетическое мечение
A. Выбор аминокислот н радиоактивного изотопа
Б. Среды
B. Биосинтетическое мечение
Г. Эффективность мечения
III. Очистка антител
А. Очистка на колонке с белком А
Б. Очистка с помощью преципитации
IV. Активность и стабильность препаратов антител
V. Тест связывания
VI. Применение и ограничения метода
Литература

Глава 13. ТЕСТЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ЛИМФОКИНОВ, ПОДДЕРЖИВАЮЩИХ РОСТ В-КЛЕТОК
I. Введение
II. Материалы
III. Условия предварительной активации
IV. Условия рекультивирования
V. Измерение активности пролиферации
Литература

Глава 14. СОЗДАНИЕ КЛЕТОЧНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ В-КЛЕТОК in vitro
I. Введение
II. Принцип метода
III. Материалы
A. Мыши
Б. Солевые растворы и среды
B. Микроносители для прикрепляющихся клеток
Г. Сефадекс G-I0
Д. Пластиковая культуральная посуда
IV. Проведение опытов
A. Сбор клеток костного мозга мыши
Б. Создание микроокружения костномозговых клеток
B. Приготовление костномозговых предшественников В-клеток
Г. Созревание культур
Д. Определение функционально активных В-клеток
V. Дополнительные замечания
Литература

Глава 15. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ В-КЛЕТОК В ПОЛУЖИДКИХ АГАРОВЫХ КУЛЬТУРАХ
I. Введение
II. Экспериментальные методы
A. Приготовление агара
Б. Приготовление среды
B. Приготовление двухслойных культур
Г. Обнаружение секретируемых антител
Д. Стимуляторы и условия роста
III. Краткий перечень полученных результатов
A. Частота встречаемости и абсолютное число клоногенных пре-В-клеток в процессе онтогенеза
Б. Временные характеристики процесса образования зон гемолиза
B. Фенотип клеточной поверхности
Литература

Глава 16. ВЫДЕЛЕНИЕ КЛОНОВ АЛЛОРЕАКТИВНЫХ Т-ХЕЛПЕРОВ ЧЕЛОВЕКА И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИХ В КАЧЕСТВЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АКТИВАТОРОВ В-КЛЕТОК
I. Цель и принцип метода
И. Материалы
A. Среда и добавки
Б. Интерлейкин-2 (ИЛ-2)
B. Среда для роста Т-клеток (GM)
Г. Клеточные суспензии
Д. Источник клеток-стимуляторов
Е. Иммуноферментный анализ
III. Методика
A. Отбор аллореактивных Т-клеток
Б. Клонирование аллореактивных Т-клеток
B. Культивирование клонов аллореактивных Т-клеток
Г. Пролиферативный тест
Д. Хелперный тест активации В-клеток
IV. Критическая оценка
Литература

Глава 17. ЦИТОЛИТИЧЕСКИЕ Т-КЛЕТОЧНЫЕ КЛОНЫ И ГИБРИДОМЫ
I. Введение
II. Материалы
A. Сбалансированный солевой раствор
Б. Среда без Са2+ н Mg2+
B. Солевой раствор для ГКН-буфера
Г. Раствор полиэтиленгликоля (ПЭГ)
Д. Нормальная среда для культивирования
Е. Среда, содержащая фактор роста Т-клеток (ФРТК)
Ж. Селективная среда
III. Методы
A. Иммунизация in vivo
Б. Получение цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) в массовых культурах
B. Выделение клонов ЦТЛ
Г. Отделение прикрепившихся клеток от подложки
Д. Получение цитолитических Т-клеточных гибридом
Е. Функциональные тесты
Ж. Выявление заражения микоплазмой и ее ликвидация
3. Замораживание клонов ЦТЛ
IV. Применение
A. Отбор антиген-специфических цитолитических Т-клеток in vitro
Б. Клоны ЦТЛ
B. Цитолитические Т-клеточные гибридомы
Литература

Глава 18. УСЛОВИЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ in vitro МЫШИНЫХ ЛИНИИ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ В-КЛЕТОК. ЗАВИСИМЫХ ОТ ИНТЕРЛЕИКИНА-3
I. Введение
II. Материалы
III. Надосадочная жидкость из культур клеток WEHI-3
IV. Определение активности ИЛ-3
V. Приготовление клеток
А. Клетки костного мозга
Б. Клетки селезенки
VI. Получение ИЛ-3-зависимых линий предшественников В-клеток
A. Удаление прикрепляющихся клеток
Б. Размножение клеток
B. Подавление миелоидного и эритроидного ростков
Г. Замораживание клеточных линий
VII. Клонирование ИЛ-3-завнснмых предшественников В-клеток
VIII. Характеристика клеточных линий
IX. Заключительные замечания
Литература

Глава 19. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК, СИНТЕЗИРУЮЩИХ РЕВМАТОИДНЫЙ ФАКТОР
I. Введение
II. Метод определения зон гемолиза
A. Антитела-мишени
Б. Восстановление и алкилирование антител-мишеней
B. Выбор гаптенной системы
Г. Конъюгирование арсоната с эритроцитами
Д. Приготовление комплемента
Е. Гемолитический тест для скрининга гибридом
Ж. Количественный гемолитический тест
III. Метод определения зон гемолиза
А. Метод Ерне
Б. Метод Каннингема
IV. Радионммунологический анализ
A. Очистка мышиного IgM из асцитной жидкости
Б. Приготовление антител к ц-цепям
B. Иодирование антител к ц-цепям с помощью хлораминового метода
Г. Очистка мышиного IgG на ДЭАЭ-целлюлозе
Д. Адсорбция на пластике
Е. Инкубация проб
Ж. Инкубация с мечеными антителами к ц-цепям
Литература

Глава 20. МЕТОДЫ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ И СОРТИРОВКИ КЛЕТОК В ИММУНОЛОГИИ
I. Введение
II. Описание клеточного сортера
A. Оптическая скамья
Б. Обработка сигналов
B. Разделение клеток
Г. Хранение данных
III. Приготовление реагентов
А. Специфичность реагентов
Б. Выбор флуорохрома
IV. Приготовление образцов
А. Приготовление клеточных суспензий
Б. Окрашивание
V. Разделение клеток
А. Общие положения
Б. Стерильные условия
VI. Получение н накопление данных
А Установка окон дискриминации
Б. Усиление сигнала и его перевод в цифровую форму
VII. Анализ данных по одному параметру и интерпретация результатов
A. Представление результатов
Б. Получение количественных данных
B. Контроли
VIII. Примеры
A. Титрование реагента
Б. «Слабопозитивные» образцы
B. Высокий уровень фона
Г. Артефакты, обусловленные агглютинацией клеток
Благодарности
Литература

Глава 21. ТАБЛИЦЫ ДЛЯ ОЦЕНКИ ЭКСПЕРИМЕНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ЛИМИТИРУЮЩИХ РАЗВЕДЕНИИ
I. Введение
II. Процентное содержание клонов, происходящих из одной клетки
III. Доверительные интервалы
IV. Тест на независимость в корреляционных матрицах 2X2
Литература

Глава 22. ПОЛУЧЕНИЕ ЛИМФОИДНЫХ ХИМЕР ПТИЦ
I. Введение
II. Принцип метода
III. Детали методики
А Генетические линии
Б. Обработка реципиентов клеток
В. Приготовление клеток фабрициевой сумки
Г. Содержание химер
IV. Анализ химер
А. Препараты лимфоцитов крови, селезенки н тимуса
Б. Усовершенствованные условия культивирования в отсутствие сыворотки
В. Цитогенетические методики
Г. Использование моноклональных антител
V. Дополнительные замечания
Литература

Глава 23. ЗАРОДЫШИ ПТИЦ В ИММУНОЛОГИИ
I. Введение
II. Материалы
А. Источник яиц
Б. Генетические маркеры и моноклональные антитела
III. Методы
A. Получение, инкубация и просвечивание яиц
Б. Высверливание скорлупы, инъекции и забор крови
B. Подавление выработки аллотипов и классов иммуноглобулинов
Г. Обработка циклофосфамидом
Д. Обработка тестостероном
Е. Ранняя хирургическая бурсэктомия
Ж. Поздняя хирургическая бурсэктомия
3. Реакции «трансплантат против хозяина»
И. Парабиоз
К. Пересадки тимуса и фабрициевой сумки зародышей
Л. Химеры зародыш—желточный мешок и рекомбинанты бластодерм
М. Облучение и восстановление костного мозга
Литература

Глава 24. ОВЦА КАК ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ В ИММУНОЛОГИИ: ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ in vitro И in vivo
I. Введение
II. Содержание экспериментальных овец
III. Процедуры
А. Забор крови
Б. Хирургические процедуры
IV. Процедуры in vitro
A. Фракционирование клеток
Б. Криоконсервация лимфоцитов
B. Функциональные тесты
Г. Иммуноцитохимия
Благодарности
Литература

Глава 25. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ Xenopus (Amphibia, Anura)
I. Введение: иммунная система Xenopus
A. Лимфоциты и лимфоидные органы Xenopus
Б. Иммуноглобулины
B. Главный комплекс гистосовместимости (МНС) Xenopus
Г. Иммунный ответ
Д. Своеобразие Xenopus как модели для исследований
II. Имеющиеся линии и виды животных
III. Хирургические процедуры на Xenopus
A. Маркировка животных
Б. Забор крови у взрослых лягушек
B. Забор крови и перитонеальной жидкости у головастиков
Г. Тимэктомня
Д. Получение химерных зародышей
Е. Пересадка кожи
IV. Подготовка лимфоцитов для клеточных культур
A. Клетки крови
Б. Суспензии клеток тимуса или селезенки
B. Получение макрофагов от взрослой лягушки
Г. Разделение клеточных популяций
V. Получение иммунологических реагентов
А. Получение антисывороток
Б. Моноклональные антитела
VI. Изучение иммунной системы
A. Иммунопреципитация иммуноглобулинов и электрофорез
Б. Иммунопреципитация мембранных полипептидов
B. Иммунофлуоресценция
Г. Гемагглютинация
Д. Цитотоксический микротест с клетками Xenopu
VII. Функциональные методы анализа иммунного ответа
A. Антителообразование и синтез иммуноглобулинов
Б. Выявление антител после изоэлектрофокусирования
B. Оценка иммунного ответа на клеточном уровне
Г. Методы исследования клеточного иммунитета
VIII. Получение соматических гибридов слиянием лимфоцитов Xenopus с клетками миеломы мышей
IX. Маркеры клеток; плоидность как маркерный признак
А. Получение полиплоидных Xenopus
Б. Способы определения плоидности клеток у химер
X. Приложение
Литература

Предметный указатель

 

скачать электронную медицинскую книгу Методы исследований в иммунологии. В 3-х томах Лефковитс И., Пернис Б., Трукко М., Такач Б. и др. скачать книгу бесплатно